DNA isoleren uit een kiwi
Inleiding
Het isoleren van DNA uit cellen is de eerste stap in veel onderzoek in de moleculaire biologie. Voordat je een bacterie ertoe kan brengen een stof te laten produceren waar in de medische wereld behoefte aan is, moet het bacterie-DNA worden geïsoleerd. Maar ook het modificeren van planten, bijvoorbeeld om ze resistent te maken tegen ziektes, begint met DNA-isolatie. Dat isoleren kan uit bacteriën, maar net zo goed uit een doodgewone kiwi.
Doel
DNA isoleren uit kiwi.
Voorbereiding
Bedenk een onderzoeksvraag voor dit practicum. Stel een toetsbare hypothese op om antwoord te krijgen op de onderzoeksvraag.
Werkplan
Materiaal voor het prepareren van het kiwi-weefsel extract
- kiwi
- (gedestilleerd) water
- bekerglas (250 ml
- zout
- afwasmiddel/shampoo
- vijzel en stamper
- trechter
- filtreerpapier
- mes
- snijplank
- glasstaaf
- waterbad
- weegschaal
- pipet (10 ml)
Bereiding van het kiwi-extract
- Weeg 3 gram zout af en meng dit met 10 ml afwasmiddel/shampoo en 100 ml (gedestilleerd) water in het bekerglas van 250 ml. Roer alles door elkaar.
- Ontdoe de kiwi van zijn schil en snijd hem in kleine stukjes. Wrijf de kiwi fijn in een vijzel met stamper. Deze stap kan al door een TOA gedaan zijn.
- Voeg de kiwimoes bij het mengsel wat je net hebt gemaakt en meng het geheel door draaibewegingen met het bekerglas te maken.
- Zet het geheel weg in een waterbad van 60 oC. Laat dit 15 minuten staan.
- Filtreer het mengsel met behulp van een filtreerpapier en een trechter in een reageerbuis.
- Je hebt ongeveer 10 ml filtraat (= kiwi-extract) nodig voor het vervolg van de proef. Wacht dus niet tot het mengsel in zijn geheel is doorgelopen.
- Als je minder dan 10 minuten over hebt doe je het isoleren de volgende les. Zet je kiwi-extract dan wel in de koelkast.
Materiaal voor het scheiden van DNA uit het kiwi-extract
- kiwi-extract
- ijskoude ethanol
- glasstaafje / pasteurpipet
- pipet (10 ml)
- maatcilinder
- wijde reageerbuis
- reageerbuisrek
Het isoleren van DNA uit het kiwi-extract
- Voeg 2-3 ml ijskoude (uit de diepvries) ethanol met een pipet toe aan reageerbuis met het kiwi-extract.
- Houd de reageerbuis schuin en schenk de ijskoude ethanol heel voorzichtig(!) op het extract. Extract en ethanol moeten zo weinig mogelijk mengen.
- Laat de reageerbuis vijf minuten helemaal stil staan.
- Wacht tot je op het grensvlak van het extract en ethanol een soort gelatine met witte vlokken en gasbelletjes ziet. Dit is DNA met daarin ontstane gasbelletjes. Na enige tijd gaat deze prop omhoog door de opwaartse kracht in de gasbelletjes. Je kunt nu met een glasstaafje voelen hoe stevig de prop DNA is.
- Haal met behulp van een pasteurpipet wat DNA uit de reageerbuis en maak hiervan een preparaat. Bekijk deze met een microscoop.
Reflectievragen
- Welke celonderdelen gaan vooral kapot tijdens het fijnwrijven in de vijzel?
- Welke celonderdelen gaan vooral kapot door het toevoegen van shampoo?
- Zout verandert de structuur van eiwitten. Wat doet zout met de chromosomen?
- In kiwicellen zit een eiwitsplitsend enzym dat de eiwitten in chromosomen splitst. Waarvoor is het in dit verband belangrijk dat het kiwimengsel precies 15 minuten in een waterbad van precies 60 °C staat?
- Het DNA ‘overleeft’ dit waterbad van 60 °C doordat het een stabiele structuur heeft. Waardoor is de structuur van DNA zo stabiel?
- Je hebt kennis gemaakt met het type werk dat biologisch analisten doen. Wat vind je van dit type werk? Is biochemisch werk iets voor jou? Waarom wel/niet?
- Kun je antwoord geven op je onderzoeksvraag en klopt jouw hypothese? Waarom wel/niet?
Link
Aanwijzingen voor het schrijven van een practicumverslag